آغشته سازی با پارافین

توسعه تکنیک‌های مرتبط با تهیه لام‌ های تهیه شده از نمونه بافت‌های مورد بررسی تحت مطالعات میکروسوپیک با میکروسکوپ‌های نوری تاریخچه‌ای نسبتاً طولانی دارد. در این مقاله سایت پاتولوژی شاپ به مفهوم آغشته‌سازی با پارافین، اصول کار، برخی روش‌های متداول و البته ایمنی کار خواهیم پرداخت تا انتها با ما همراه باشید.

پارافین پاتولوژی

امروزه پارافین پاتولوژی همچنان محبوب‌ترین ماده نفوذ و درجانشانی در آزمایشگاه بافت‌شناسی است. پارافین مخلوطی از هیدروکربن‌های با زنجیره بلند است که در کراکینگ روغن معدنی تولید می‌شود.

آغشته‌سازی با پارافین

نقطه ذوب پارافین

پارافین کریستالیزه یا موم پارافین با درجه ذوب‌های مختلف در بازار تجاری وجود دارد. خواص پارافین بسته به نقطه ذوب متفاوت است. پارافین با نقطه ذوب پایین معمولاً نرم‌تر است، پارافین با نقطه ذوب بالاتر معمولاً سخت‌تر است که می‌تواند میکروتومی را تحت تأثیر قرار دهد. دامنه نقطه ذوب پارافین بین 40 تا 70 درجه سانتیگراد است. حرارت دادن پارافین تا دمای بالا باعث تغییر خواص پارافین می‌شود.

بافتی که با پارافین آغشته شده است، یک ماتریکس را تشکیل می‌دهد که از اعوجاج ساختار بافت در طول میکروتومی جلوگیری می‌کند. برای ایجاد نوار خوب در طول میکروتومی، لازم است پارافین با سختی مناسب در دمای اتاق انتخاب شود.

مزیت‌های پارافین

پارافین دارای طیف گسترده‌ای از نقاط ذوب است که برای استفاده در مناطق مختلف آب‌و‌هوایی جهان متناسب است.
ارزان و در بازار تجاری به سهولت در دسترس است.
تهیه برش‌های با کیفیت بالا را ممکن می‌کند.
به راحتی در پروتکل‌های عملی مختلف قابلیت سازگار شدن دارد.
برای اکثر رنگ آمیزی‌های معمولی و خاص، قابل استفاده است.

درجانشانی بافت در پارافین

درجانشانی شامل محصور کردن نمونه‌های به درستی پردازش شده و جهت‌گیری شده در یک محیط حمایتی که پشتیبانی خارجی را در طول میکروسکوپ فراهم می‌کند، است. محیط درجانشانی باید تمام فضاهای داخل بافت را پر کند و از اجزای سلولی حمایت کند. این محیط حمایت کننده باید بتواند الاستیسیته، مقاومت برش در برابر اعوجاج و در عین حال تسهیل برش را فراهم کند.

دیاگرام مراحل یک پژوهش بافت شناسی که جایگاه آغشته‌سازی با پارافین(درجانشانی) را نشان می‌دهد.

اکثر آزمایشگاه‌ها از دستگاه‌های درجانشانی استفاده می‌کنند که از سه ماژول تشکیل شده‌اند: یک دستگاه پخش پارافین، یک صفحه سرد و یک فضای ذخیره‌سازی گرم شده برای قالب‌ها و کاست‌های بافت.

مزایای استفاده از سیستم درجانشانی

مزایای استفاده از سیستم درجانشانی عبارتند از:

سهولت در عملیات
سرعت در فرایند کار
ایجاد یک واحد یونیک از بافت و نگهدارنده ناشی از به‌هم چسبیدگی مستحکم
تثبیت بلوک‌ها بلافاصله پس از توزیع
قابلیت شناسایی ثابت و دائمی

سیستم درجانشانی

کنترل کیفیت درجانشانی

برای دست‌یابی به نتیجه مناسب از فعالیت درجانشانی، دمای همه پارافین‌ریزها، حمام‌های آب شناور و پردازنده‌های خودکار باید به‌دقت پایش و ثبت شوند. آزمایشگاه بافت شناسی باید خط‌مشی و دستورالعملی داشته باشد که به مسائل کیفی و اقدامات اصلاحی بپردازد.

روش آغشته‌سازی با پارافین

برای آغشته‌سازی، نمونه‌ها باید در پارافین ذوب شده در اجاق غوطه‌ور شوند. پس از دو مرحله غوطه‌ور‌سازی در پارافین ذوب شده (هر غوطه‌وری شامل 1 دقیقه در پارافین ذوب شده 60 درجه سانتیگراد)، نمونه‌ها باید برای سخت شدن در دمای اتاق نگهداری شوند یا در صورت لزوم بر روی یک پلیت سردکننده(کلد پلیت) قرار گیرند.

اقدامات احتیاطی در درجانشانی در پارافین

از آنجایی‌که قرار‌دادن بافت‌ها به مدت طولانی در پارافین ذوب شده باعث انقباض و سخت شدن بافت‌ها می‌شود و برش را دشوار می‌کند، بافت را نباید برای مدت طولانی‌تر از زمان لازم در محیط قرار داد.

با این حال، هنگام استفاده از پارافین به عنوان محیط درجانشانی، باید مراقب نوسانات دما بود که ممکن است باعث تغییر در اندازه بلوک شود. به منظور تولید بلوک برش با کیفیت بالا، فراهم کردن محیطی با دمای متعادل در طول برش مهم است. به احتمال زیاد ضخامت برش تحت تأثیر هیدراتاسیون صفحه بلوک پارافین قرار نمی‌گیرد.

اثر فرآیند بهینه سازی شده (A) نمونه ها هنگام استفاده از فرآیند تعبیه بهبود یافته. (B) نمونه های تعبیه شده معمولی هنگام استفاده از قالب سیلیکونی و فرآیند تعبیه بهبود یافته.

درجانشانی پارافین

نمونه‌های نفوذ داده شده را به محفظه کاست دستگاه تعبیه بافت اضافه کنید. اگر نمونه‌ها قبل از درجانشانی در دمای اتاق نگهداری شده‌اند، بگذارید پارافین اضافی از کاست‌ها ذوب شود و آن‌هارا به مدت 20 دقیقه در جیب نگهدارنده کاست بگذارید. اگر پارافین از قبل گرم شده است، می‌توانید پس از چند دقیقه درجانشانی را شروع کنید.

برای درجانشانی نمونه‌ها:

نوار کاست را باز کنید.
یک قالب فلزی را با پارافین پر کنید.
با یک پنس مناسب و گرم؛ نمونه‌ها را از نوار کاست به قالب پر شده با پارافین منتقل کنید. ساختارها را (به صورت مقطعی به پایین) به سمت پایین قالب فشار دهید.
مجموعه را روی یک صفحه سرد قرار دهید تا کمی سفت شود و نمونه در کف قالب بماند.
قبل از اینکه پارافین کاملاً سفت شود، درب کاست درجانشانی را روی قالب اضافه کنید.
ساختار تعبیه شده را در صفحه خنک کننده بگذارید تا به راحتی از قالب خارج شود (20 دقیقه).

نکته 1: قالب را با بافت تعبیه شده در آن برای مدت طولانی در صفحه خنک کننده نگذارید اگر پارافین خیلی سرد شود ممکن است بافت بشکند.

نکته 2: بلوک‌های تعبیه شده پارافینی را می توان برای مدت طولانی در دمای اتاق نگهداری کرد. بافت ثابت فرمالدئید و پارافین تعبیه شده (FFPE) را می توان به راحتی در شرایط عادی آزمایشگاهی برای مدت طولانی.

ذخیره کرد.

اصول ایمنی کار با پارافین

برای درجانشانی پارافین باید به برخی نکات مهم توجه کرد تا کار به دست یابی به نتیجه مناسب منجر شود. برخی از این ملاحظات عبارتند از:

ذوب پارافین

¾ ظرف مناسب را با پارافین پر کنید و در فر خشک با دمای 58 درجه سانتی گراد قرار دهید تا ذوب شود.

توجه: ممکن است چند ساعت طول بکشد تا ذوب شود. دمای فر را زیاد نکنید، دمای بالاتر باعث سفت و شکننده شدن پارافین می‌شود.

نفوذ پارافین

پارافین در به دمای 58 درجه سانتیگراد برسانید. نوارهای کاست بافت را به ظرف محتوی پارافین ذوب شده منتقل کنید. بگذارید به مدت 45 دقیقه در فر بماند.

نکته: انتقال کاست‌ها به پارافین ذوب شده باید به سرعت انجام شود زیرا پارافین در دمای 56 درجه سانتی گراد جامد می‌شود.

سخن پایانی:

محیط درجانشانی پارافین به طور کلی برای تجزیه و تحلیل بافت شناسی معمول، کافی و برای اکثر کاربردهای بالینی هیستوپاتولوژی نسبتاً مناسب است. این محیط درجانشانی معمولاً برای تجزیه و تحلیل استریولوژیک نیز استفاده می‌شود. انجام مراحل برش سریالی و نمونه برداری مورد نیاز با بافت‌های درجانشانی شده با پارافین بسیار آسان است. در این مقاله سایت پاتولوژی شاپ مختصراً به برخی اصول کار آغشته سازی با پارافین پرداختیم. برای انتخاب پارافین با سختی مناسب و تهیه هر نوع پارافین که نیاز دارید می‌توانید با کارشناسان مجرب سایت پاتولوژی شاپ مشورت کنید. به سایت مراجعه و تماس برقرار کنید.

منابع:

https://www.sciencedirect.com/topics/biochemistry-genetics-and-molecular-biology/paraffin-embedding

https://www.cellink.com/protocols/paraffin-embedding

https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/paraffin