تیشو فلوت (حمام بافت)
تیشو فلوت چیست؟
وقتی از واژه Flotation استفاده می‌کنیم، منظور شناورسازی است. این شناورسازی یک مفهوم متداول در علم شیمی است. ابزاری که برای این شناورسازی استفاده می‌شود، نوعی ظرف است که به طور اختصاصی به این منظور طراحی شده و بکار گرفته می‌شود. این ظرف‌ها را اصطلاحاً “حمام” هم می‌نامند. مثلاً تیشو فلوت که در این بحث در مورد آن صحبت می‌شود، حمام‌هایی هستند که برای جلوگیری از چین‌وچروک و اعوجاج در حین آماده‌سازی مقاطع بافتی که در پارافین، نشانده شده‌اند. در این پروسه‌ها در برخی موارد از واژه embedded استفاده می‌شود. در واقع این مفهوم تعریف متفاوتی دارد. در شیمی و علوم آزمایشگاهی استفاده گسترده‌ای از این مفهوم می‌شود. طبق ثبت سایت https://www.thesaurus.com/ برای این واژه سینونیم های زیر پیشنهاد شده است:
لذا برای درک این مفهوم ما ازاین‌پس از واژه نشانده شده، استفاده می‌کنیم. یعنی بافتی که در پارافین نشانده شده، برای جلوگیری از آسیب و حفظ کیفیت در حمام شناور قرار داده می‌شوند.
کاربردهای حمام شناور
- حفظ میزان دما و حالت انعطاف در پارافین بستر.
- شناور نمودن لایه‌های نشانده شده در پارافین.
- ایجاد یک حالت کشش ملایم در اسلایس‌های تهیه شده از بافت‌ها.
- ازبین‌بردن چین‌وچروک‌ها قبل از قراردادن اسلایس‌ها روی لام‌ها.
به‌کارگیری حمام شناور یا حمام آب، مرحله میانی بین تهیه برش‌های بافت نشانده شده در پارافین و تثبیت آنها بر روی اسلایدها است. نمی‌توان نوارهای پارافینی را روی اسلایدها چسباند! ضمن اینکه حمام آب گرم، به بافت اجازه می‌دهد قبل از تثبیت روی یک اسلاید شیشه‌ای، به‌قدر لازم منعطف و صاف شود. همچنین گرما باعث چسبیدن پارافین به لام‌های شیشه‌ای می‌شود.
نقطه ذوب پارافین در حالت‌های مختلف متفاوت است؛ مثلاً پارافین گرانول شده بین 56 الی 58 درجه سانتیگراد است که آن را برای استفاده در پاتولوژی کاملاً مناسب می‌کند. حمام‌های شناور با آب مقطر پر می‌شوند، معمولاً در دمای 40 تا 50 درجه سانتیگراد (دمای 5 تا 10 درجه سانتیگراد زیر نقطه ذوب پارافین) گرم می‌شوند و تلاش می‌شود دمای آب در همین محدوده حفظ شود. این محدوده دمایی بهینه برای انواع مختلف پارافین است. پارافین سخت برای شل شدن به دمای آب بالاتری نیاز دارد، در حالی که پارافین‌های نرم‌تر از دمای پایین‌تر آب سود می‌برند زیرا ممکن است در دماهای بالاتر تجزیه شوند.
حمام بافت شامل بخش‌های زیر است:
- محفظه اصلی یا تانک استیل اصلی
- المنت‌های حرارتی برقی که موجب می‌شوند بدون نیاز به شعله، درجه حرارت آب داخل تانک به سطح مورد نیاز برسد، این المنت‌ها در کف و دیواره‌های تانک جاسازی شده و بین دو جدار خارجی و محفظه داخلی تانک قرار می‌گیرند.
- محفظه یک پارچه داخلی تانک اصلی که یک محفظه سیلد شده ضد زنگ، جهت کنترل خروج آب و مایعات است و مجهز به زهکشی‌های مخزن برای تخلیه و شستشو هستند
- سیستم‌های اخطار قابل شنیدن، قابل مشاهده یا هر دو که قابلیت تنظیم توسط کاربر را داشته باشد
- منبع تغذیه مناسب برای تامین جریان الکتریسیته در المنت‌ها
- نمایشگرهای دمای واقعی و/یا نقطه تنظیم شده
- ترموستات ایمنی اولیه و اتوماتیک همراه با قابلیت تنظیم و کالیبراسیون
البته بیشتر مدل‌های پیشرفته به سیستم‌های تأمین روشنایی هم مجهز هستند.
نحوه نگهداری تیشو فلوت
مخزن دستگاه باید هر روز تمیز شود
پارافین‌های رها شده یا چسبیده به بدنه داخلی باید با گاز پاک شود البته از الکل هم می‌توان استفاده کرد.
سطح آب باید مرتباً با کیم‌ویپ یا سایر دستمال‌های آزمایشگاهی تمیز شود تا از آلودگی زباله‌های بین هر اسلایس‌های نشانده شده در پارافین جلوگیری شود.
نحوه کار دستگاه تیشو فلوت
- پس از کنترل تمیز بودن مخزن، آنرا تا حد لازم از آب مقطر پر نمائید.
- اگر از پروب مغناطیسی کنترل حرارت استفاده می‌کنید آنرا درون تانک قرار دهید
- اسلایس‌ها را بشکل مناسب درون محفظه مخصوص بچینید.
- با فشار دادن دکمه روشن کننده، المنت‌ها را روشن کنید.
- درجه حرارت حمام را کنترل و وقتی به ثبات رسید ظرف حاوی اسلایس‌ها را در حمام قرار دهید.
- تایمر را روشن کرده و روی بازه مناسب تنظیم کنید.
- ثبات دمای آب را در طول پروسه تا خارج کردن اسلایس‌ها کنترل نمائید.
نکات مهم در هنگام کار با حمام بافت
- می‌توان با هدف کاهش کشش سطحی آب حجم مناسبی الکل 95٪ به آب اضافه نمود. این کار روند ازبین‌رفتن چین‌وچروک‌ها تسریع می‌کند.
- ممکن است لازم باشد دمای آب برای بافت‌های چربی؛ مانند سینه یا مغز کاهش یابد.
- در برخی موارد مقداری چسب مناسب به آب اضافه می‌شود تا به چسبندگی اسلاید کمک کند (تکنیکال کامنت)
- تعویض روزانه آب مقطر حمام موجب تمیز نگه داشته شدن آب حمام می‌شود.
- پس از تخلیه آب در انتهای استفاده، مخزن خالی باید به شکل مناسبی پوشانده نگه داشته شود تا از ته‌نشین شدن الیاف و گردوغبار و تبدیل‌شدن حمام به یک آلاینده بالقوه، پیشگیری گردد.
- مخزن باید هر روز تمیز و پارافین رسوب‌کرده در مخزن با گاز و الکل پاک شود.
- جهت جلوگیری از آلوده‌شدن لایه‌های پارافینی از یک لایه به لایه دیگر، سطح آب باید با کیم‌ویپ یا سایر دستمال‌های آزمایشگاهی تمیز شود.
- حمام آبی که خیلی سرد باشد چین و چروک‌های قسمت‌های بافت را از بین نمی‌برد.
- حمام آبی که خیلی داغ باشد ممکن است پارافین را ذوب کرده و مورفولوژی بافت را تغییر دهد.
- باید دقت کرد که حمام آب پارازیت‌ها را به اسلایس‌ها القا نکند.
مشکلات و عیب‌یابی حمام بافت
حمام آب خیلی سرد است: احتمالاً سیستم پاور یا المنت‌ها مشکل دارند که باید بررسی شده و حل شود. این مسئله باعث عدم رفع چین‌وچروک‌ها و کاهش کیفیت لام می‌شود.
حمام آب خیلی گرم است: ترموستات کنترل دمای آب باید کنترل شود. اگر درجه حرارت از میزان موردنظر بالاتر برود، موجب می‌شود پارافین ذوب شده یا تبخیر شود و در نتیجه نمونه‌ها خراب شوند.
قراردادن برای مدت‌زمان طولانی: اگر نمونه‌ها برای مدتی بیشتر از زمان موردنیاز در حمام آب شناور بمانند، میزان کشش سلول‌ها که به دنبال کشش بیش از حد پارافین اتفاق می‌افتد می‌تواند به کیفیت نمونه آسیب برساند
حباب‌های هوا در حمام: وجود حباب‌های هوا بر سطح آب حمام را باید قبل از قراردادن نمونه‌ها کنترل کرد. این حباب‌ها بر سطح زیرین نمونه چسبیده و ضمن باقی‌گذاردن نوعی لکه (پارازیت) بر روی نمونه، از تماس مستقیم آب و پارافین جلوگیری کرده و ایجاد عایق می‌نمایند. این مسئله یکدستی اثر پارافین را مخدوش کرده و نمونه ممکن است قابل‌بررسی نباشد. اثرات حباب‌ها ممکن است با خشک‌شدن اسلایس‌ها ناپدید شوند. بااین‌حال معمولاً در طول رنگ‌آمیزی شناور باقی می‌مانند؛ بنابراین، باید از تشکیل حباب هوا در حمام شناور اجتناب شود و هرگونه حباب قابل‌مشاهده باید قبل از گذاشتن اسلایس‌ها روی آب از حمام خارج شود.
نمونه های خارج از عرف یا فیک: این حالت زمانی اتفاق می افتد که نمونه ها یا لام یا اسلاید تهیه شده قبل از خشک شدن افقی، به درستی برداشت نشده باشند. در نتیجه قسمتی از بافت برش شده گاهی روی لام حرکت می‌کنند و صاف خشک نمی‌شوند و در نتیجه ظاهری برجسته و خارج از فوکوس در زیر میکروسکوپ(به دلیل تغییر ارتفاع از سطح لام) ایجاد می‌کنند. برای جلوگیری از این مشکل، باید تا حد ممکن برش های تهیه شده سبکتر تهیه و به اصلاح، تر در فلت قرار گیرد. برای غلبه بر این مشکل، همچنین باید قبل از قرارگرفتن اسلایس‌ها، تانک حمام را به شکل مناسبی تخلیه و مجددا از آب تمیز پر نمود.
چسبندگی نامطلوب: استفاده از چسب‌های مبتنی بر پروتئین، مانند ژلاتین، چسب یا نشاسته در حمام آب، ممکن است منجر به تجمع معرف‌ها در زیر اسلایس‌های ورآمده و مسدودشدن سطح باردار لام شود. این موضوع ممکن است باعث چسبندگی نامطلوب و در نتیجه رنگ‌آمیزی ناهموار شود. نمای زیر میکروسکوپ یک خط ضخیم را در مجاورت اسلایس نشان می‌دهد.